自1983 年以来转基因技术的进步导致了 35S 启动子的广泛使用,该启动子缺乏特异性并且可能致命。为了克服这些限制,研究已转向诱导型启动子,例如糖皮质激素诱导系统,从而可以精确控制植物中的基因表达。然而诱导剂地塞米松(DEX)具有一定的毒性,单独使用DEX可以诱导防御相关基因的表达。鹅掌楸 杂交种表现出对于观赏和经济目的有价值的特征。因此,需要稳定、精准的诱导表达系统来定时、定量地人为调控关键基因的表达。
2024年2月29日,林业研究发表题为“ Establishment of a glucocorticoid inducible system for adjustment somatic胚胎发生在鹅掌楸杂种” 的论文。
该研究为鹅掌楸开发了一种定制的地塞米松/糖皮质激素受体 (DEX/GR) 系统,重点关注 对植物再生至关重要的 WUSCHEL (WUS)基因。
最初,构建了p35S:LhWUS-GFP-GR 载体并将其引入杂交体的胚性愈伤组织中。 DEX 处理后,LhWUS-GFP-GR 融合蛋白有效转位到细胞核中,而未经处理的对照仍保留在细胞质中。此外,不同浓度的 DEX 显示融合蛋白以剂量依赖性方式快速易位到细胞核中,1 mM DEX 在 5 分钟内达到峰值荧光。
探讨了 DEX 对愈伤组织增殖和体细胞胚胎发生的影响。过表达LhWUS-GR的转基因愈伤组织在 DEX 处理后表现出LhWUS 表达增加 和愈伤组织增殖增强,特别是在 1 μ 浓度下,表明促进生长的最佳水平。此外,DEX处理的p35S:LhWUS-GR 愈伤组织显示出比未处理的对照更高数量的体细胞胚胎,表明DEX在体细胞胚胎发生中的剂量效应作用。有趣的是,这些体细胞胚胎的再生植物可以发育成完整的植物。经过 DEX 处理后,顶端分生组织显着增大,凸显了 DEX/GR 系统在影响植物生长方面的有效性。
总之,本研究将DEX/GR系统建立为鹅掌楸杂交遗传探索的重要工具,有效调控基因表达和体细胞胚胎发生,突出了功能遗传学在鹅掌楸杂交 中的潜在作用 及其在其他物种中的适用性。该系统能够精确控制外源基因的表达,促进详细的功能分析并提供对关键发育过程调节的见解。
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